Seminarium Zakładu Biofizyki
sala nr 3091 ICM, waście od strony Zakładu Biofizyki, al. Żwirki i Wigury 93
mgr Joanna Krasowska (IFD UW)
Zwijanie de novo, powtórne zwijanie i agregacja EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) w pomiarach stopped-flow
De novo folding, refolding and aggregation of EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) by stopped-flow experiments
Białko zielonej fluorescencji jest interesującym obiektem badań zwijania białek ze względu na tworzenie się chromoforu po uzyskaniu przez białko struktury natywnej. Raz utworzony chromofor pozostaje w strukturze nawet przy denaturacji białka, co zdaje się być przyczyną obserwowanych różnic między zwijaniem powtórnym i de novo. Chromofor może być dodatkowym wskaźnikiem podczas monitorowania zwijania GFP. Konkurencyjnym procesem towarzyszącym zwijaniu jest agregacja, która jest rezultatem nieprawidłowego zwinięcia biomolekuł. Wydaje się, że nie można rozpatrywać zwijania bez jednoczesnej oceny stopnia agregacji. Kompleksowe pomiary omówionych wyżej procesów zostały przeprowadzone przy użyciu techniki zatrzymanego przepływu (stopped-flow).
Green Fluorescent Protein is an interesting subject of protein folding study due to formation of a chromophore, what is possible only after obtaining the native protein structure. Once created, chromophore remains in the structure even after protein denaturation. This seems to be the reason of observed differences between refolding and de novo folding. Chromophore might be an additional marker in monitoring GFP folding. Aggregation, one of results of biomolecules misfolding, is a competitive process concomitant with folding. It seems that it is impossible to elucidate folding without simultaneous estimation of the contribution of aggregation. Complex measurements of the processes mentioned above were carried out using a stopped-flow technique.