Seminarium Zakładu Biofizyki

Zbadano powinowactwo serii benzylowanych analogów kapu do trzech izoform ludzkiego białka eIF4E: eIF4E1a, eIF4E1b oraz eIF4E2 (4EHP). Stosując metodę miareczkowania fluorescencyjnego zostały wyznaczone stałe asocjacji dla kompleksów izoform z serią mononukleotydowych, benzylowych i metylowych analogów kapu, różniących się ilością grup fosforanowych oraz dla kompleksów z dinukleotydowymi analogami kapu. Wyniki pokazały podobne powinowactwo benzylowych i metylowych analogów kapu do kanonicznego czynnika inicjacji translacji eIF4E1a oraz izoformy eIF4E2, zaś izoforma eIF4E1b wykazuje zaskakująco wysokie powinowactwo do analogów benzylowych. Pomiary widm CD w zakresie bliskiego nadfioletu, wskazują, iż w wyniku tworzenia kompleksu białko-cap w izoformach eIF4E zachodzą różne zmiany konformacyjne reszt tryptofanów i ich otoczenia, zależne od grupy wprowadzonej w pozycji N7 guaniny analogu kapu.

eIF4E has been found to be overexpressed in a broad spectrum of cancer cells. Due to this fact eIF4E is considered as a target in anticancer therapy. Recently N7-benzylated guanosine cap analogues were reported as effective inhibitors of translation initiation. The binding affinity of N7-benzylated guanosine cap analogs for eIF4E isoforms: eIF4E1a, eIF4E1b and eIF4E2 (4EHP) were investigated. The association constants were obtained for mononucleotide cap analogues with methyl or benzyl group in N7 position of guanine ring, and with one to three phosphate group in the chain, as well as for dinucleotide caps, using time synchronized fluorescence titration. Similar association constants were found for complexes of benzylated and methylated cap analogues with canonical 4E (eIF4E1a) and with eIF4E2 isoform, On the contrary, eIF4E1b reveals much greater affinity for benzyl than for methyl analogues. Additionally, near UV CD spectra of eIF4E-cap complexes were performed, which confirm different conformational changes of tryptophan residues and their close surroundings, due to modification at N7 of the cap analogues.