Seminarium Zakładu Biofizyki

Spektroskopia dichroizmu kołowego umożliwia charakterystykę zmian drugo- i trzeciorzędowej struktury białek w roztworach pod wpływem różnych czynników. W prezentacji tej omówię zastosowanie kinetycznych i stacjonarnych pomiarów dichroizmu kołowego roztworów α-chymotrypsyny w obecności kwasu dodecylosiarkowego (SDS) w zakresie bliskiego oraz dalekiego ultrafioletu. Eksperymenty zostały przeprowadzone z użyciem 40 µM roztworu białka w 20 mM buforze fosforanowym o pH 6.4, z dodatkiem 5 mM NaCl oraz roztworów SDS w tym samym buforze o stężeniach w zakresie od 20 µM do 20 mM. Obserwowane zmiany w widmach CD wskazują na odpowiednie zmiany w strukturze drugo- lub trzeciorzędowej, a pomiary CD metodami spektroskopii zatrzymanego przepływu, w wybranych długościach fali, pozwalają wyznaczyć stałe szybkości charakteryzujące te zmiany.

Circular dichroism (CD) spectra are highly sensitive to changes of the secondary and tertiary structure of proteins in solutions under influence of different factors. The objective of this presentation is to describe application of stationary and kinetic methods of circular dichroism in the far and near UV to α-chymotrypsin and sodium dodecyl sulphate (SDS). Our experiments were done on 40 µM protein solutions in 20 mM phosphate buffer, pH 6.4, with addition of 5 mM NaCl, and SDS solutions in the same buffer with concentrations ranging from 20 µM to 20 mM. The observed changes in the CD spectra indicate corresponding changes in the secondary or tertiary structure whereas stopped-flow CD measurements at selected wavelengths give insight into rate constants characterizing these changes.