Seminarium Zakładu Biofizyki

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein, S65T/F64L) to małe białko globularne złożone z 238 aminokwasów o unikalnych właściwościach emisji w zakresie widzialnym, które pozwalają na użycie molekuły jako markera biologicznego. Aby w pełni wykorzystać możliwości białka, np. do wizualizacji fałdowania innych molekuł, należy poznać wydajność procesu formowania struktury natywnej EGFP i prześledzić konkurencyjny proces agregacji białka. Wykorzystując metodę ultrawirowania analitycznego z wykorzystaniem dwu systemów detekcji, absorpcyjnej i fluorescencyjnej, obserwowano agregację towarzyszącą fałdowaniu EGFP oczyszczonego z ciałek inkluzyjnych w buforze zawierającym 6M chlorowodorek guanidyny. Wykazano, że system detekcji absorpcyjnej znajduje zastosowanie w obserwacji procesu agregacji, natomiast system detekcji fluorescencyjnej jest odpowiedni do badania stabilności prawidłowo zwiniętego monomeru EGFP.

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein, S65T/F64L) is a small, globular protein of 238 amino acids. The unique properties of EGFP, i. e. emission of visible light, allow to use the molecule as a biological marker. To get out the most of the protein capabillities, e.g. visualisation of the folding, it is necessary to investigate the efficiency of the folding proces and the competitive process of aggregation. By using the analytical ultracentrifugation with two detection systems, absorption and fluorescence, we have observed the aggregation accompanying the folding of EGFP from inclusion bodies in a buffer containing 6M guanidinium hydrochloride. It was shown, that the absorption is proper to follow the aggregation process, while the fluorescence detection system can be used to observe the stability of the folded monomer.