Seminarium Zakładu Biofizyki
sala B2.38, ul. Pasteura 5
2017-12-01 (14:00) 
mgr Małgorzata Bartkiewicz (IFD UW)
Właściwości nieświecącego mutanta białka zielonej fluorescencji a mechanizm tworzenia się chromoforu
Non–fluorescent mutant of Green Fluorescent Protein sheds new light on the chromophore formation mechanism
W celu pogłębienia wiedzy na temat mechanizmu dojrzewania chromoforu białka zielonej fluorescencji (GFP) stworzono nieświecącego mutanta S65T/G67A-GFP. Brak fluorescencji znamionuje chromofor niefunkcjonalny, co oznacza, że proces dojrzewania musiał zostać przerwany. W procesie dojrzewania chromoforu wyodrębniono trzy etapy: cyklizację, oksydację i dehydratację. W zaproponowanych w literaturze mechanizmach wyróżniają się dwa. Pierwszym etapem zawsze jest cyklizacja, a następnie w mechanizmie A następuje dehydratacja, a potem oksydacja, zaś w mechanizmie B oksydacja, a następnie dehydratacja. Wykorzystując spektrometrię mas (Thermo Orbitrap Ellite) sprzężoną z chromatografią cieczową (Thermo EASY-nLC) ustaliliśmy, którą ścieżkę wybierają białka z mutacją S65T.
To help us widen our knowledge of chromophore maturation process of Green Fluorescent Protein (GFP), the non–fluorescent mutant S65T/G67A-GFP was created. Lack of the fluorescence originates from the presence of a non–functional chromophore, and indicates that the chromophore maturation process was interrupted. Commonly proposed concepts include three main stages: cyclization, dehydration, and oxidation. Two mechanisms particularly stand out: cyclisation–dehydration–oxidation (Mechanism A) and cyclization-oxidation-dehydratation (Mechanism B). By using mass spectrometry (Thermo Orbitrap Ellite) coupled with liquid chromatography (Thermo EASY-nLC) it was determined, which path follows GFP with S65T mutation.